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金鸡报晓迎酉年 闻鸡起舞齐开工
新年开工之际,处处洋溢着新春喜庆的气息。2017年2月6日,年初十,是众生药业酉年开工之日。亚虎娱乐电脑领导班子一大早在亚虎娱乐电脑门口喜迎员工们回“家”,送上新春祝贺并为大家派发开工红包。喜悦之情溢于言表的员工们从领导手中接过开工红包,“鸡”情满满地投入到新一年的工作当中。
传承创新 迎难而上 破立结合 逆风飞扬——2016年度总结表彰大会暨2017迎新会
2016年度总结表彰大会暨2017迎新会于2017年1月14日在亚虎娱乐电脑五楼礼堂隆重举行。亚虎娱乐电脑中高层管理人员以及各部门代表人员出席了会议。
2016年第十一届石龙打击食品药品违法犯罪协作会议与会领导莅临亚虎娱乐电脑参观调研的简讯
2016年11月30日,由广东省食品药品监督管理局、广东省公安厅、法制日报社、东莞市人民政府联合主办的2016年第十一届石龙打击食品药品违法犯罪协作会议”在石龙隆重召开,亚虎娱乐电脑作为协办方受邀出席了此次会议。
亚虎娱乐电脑控股子亚虎娱乐电脑新建中药材深加工项目奠基仪式的简讯
亚虎娱乐电脑董事长于2016年5月31日出席参加亚虎娱乐电脑控股子亚虎娱乐电脑沾益县益康中药饮片有限责任亚虎娱乐电脑新建中药材深加工项目的奠基仪式。项目奠基仪式现场亚虎娱乐电脑
成功承办县级公立医院改革岭南论坛暨分级诊疗研讨会
县级公立医院改革岭南论坛暨分级诊疗研讨会于2016年5月13-15日在东莞圆满召开。此次会议由《中国县域卫生》杂志主办,众生药业独家承办,会

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复方血栓通胶囊对糖尿病大鼠视网膜微血管改变的防治研究

【摘要】目的观察复方血栓通胶囊对糖尿病大鼠视网膜微血管病变的干预效果。方法:正常雄性wistar大鼠作为正常对照组(N组)。链脲佐菌素(STZ)诱导wistar大鼠糖尿病模型·。将sTZ诱导的糖尿病大鼠分为糖尿病对照组(DM组)和复方血栓通胶囊治疗组(FXST组)。DM组未接受其他任何治疗;FXST组按900mg/kg的剂量.采用经食道灌胃给药方法给予复方血栓通颗粒胶囊进行治疗,每日1次。第20周时到达实验终点。行视网膜消化铺片。显微镜下观察微血管改变。计算内皮细胞/周细胞(E/P)比值,图象系统计算血管相对面积。并行透射电子显微镜检查。观察毛细血管基底膜厚度及周细胞、内皮细胞超微结构变化。结果视网膜消化铺片显示,20周时,DM组大鼠视网膜毛细血管纡曲。管径大小不一。出现节段性膨大、节段性管腔狭窄甚至闭塞,周细胞数目显著减少,E/P比值增高。血管相对面积增大,可见较多无细胞毛细血管、周细胞鬼影等。FXST组大鼠视网膜改变糖尿病对照组轻,E/P比值、血管相对面积均更接近于N组。透射电子显微镜检查显示。DM组大鼠毛细血管基底膜明显增厚。而FxsT组相应的超微改变轻微。结论复方血栓通胶囊能有效地防治糖尿病大鼠视网膜微血管改变。
【关键词】糖尿病视网膜病变/药物疗法;植物制剂/治疗应用;糖尿病。实验性;复方血栓通胶囊  中图分类号:R774.1 R287.81
ExperimentaI study of Fufang XueShuanTong on prevention for retinal micrangium changes in diabetic rats
HUANG Chuang-xin,YU Qiang,CHEN Xiao,et al.Zhongshan Ophthamic Center,Sun  yat—sen Universny,State Key Laboratory ,Ophthalmology,Guangzhou,510060,China.
Corresponding author:YU Qiang,Email:Yuqiang-gd@tom.com
【Abstract】objective To observe the effect of Fufang XueShuanTong(FXST)on prevention for retinal microangiopathy of diabetic rats.Methods  Take the normal male Wistar rats as normal controlgroup;take the streptozotocin(STZ) Wistar rats as diabetic model group.And then the diabetic model group was divided into two groups:diabetic control group(without other treatment)and FXST treatment group(with FXST at dose 900 mg/kg,by the way of given medicine from esophagus to stomach,1 time/day, experimental period was 20 weeks).When all the animals had been raised for 20 weeks,not only retinal digesting preparations were used,the endothelium/pericyte ratio(E/P ratio)and micro—vascularchanges were observed by mictoscope,vascular reIative area were measured by image system.but also the thickness of capillary basement membrane,the ultrastructural changes of endothelium and pericyte were observed
by transmission electron microscope.ResuIts 0n the 20th week,retinal digesting preparations showed that acellular capillaries,irreguIar vessel nets,segmental expansion。segmental stricture evenocclusion,pericyte number decreased obviously。E/P ratio increased,vascular relative area increased and ghosts of pericytes etc in diabetic control group.Compared to diabetic control group,the retinal changesof FXST treatment group was lighter,the E/P ratio and vascular relative area were closer to normaIcontrol group.Transmission electron microscopy results showed that thickness of basement membranewas increased in DM group,vascular change was light in FXST treated group.ConcIusions  FXST canpreventthe changes of micrangium in diabetic rats effectively.
【Key words】Diabetic retinopathy/drug therapy;Plant preparations/therapeutic use;Diabetes mellitus,experimental; Fufang Xueshuantong Jiaonang
糖尿病视网膜病变(DR)是糖尿病(DM)最为常见和严重的微血管并发症之一,也是成人盲的主要致盲性眼病之一[1]。其病理改变主要有毛细血管周细胞选择性凋亡、微血管基底膜增厚、内皮细胞增生、微动脉瘤形成、新生血管形成等口[2,3]。目前常用的DR治疗方法中。视网膜激光光凝和玻璃体手术只能挽救一部分视网膜功能。所以,如何利用药物防治DR的发生发展就显得非常重要。复方血栓通胶囊是纯中药制剂,有改善微循环、清除自由基、调节凝血状态、改善血液流变学状态等效果[4-7]。临床上该药广泛用于跟底血管性疾病,对早期预防DR有一定功效,在增生期DR手术治疗后也有辅助治疗作用[8]。但其药物作用的病理基础研究尚未见报道。为此,我们就复方血栓通对DM大鼠视网膜病变的防治效果进行了观察,以期为复方血栓通胶囊防治DR提供实验依据。
l材料和方法
无特定病原体(SPF)级雄性wistar大鼠由南方大学动物中心提供。体重180~220 g,检查屈光间质清晰,瞳孔等大等圆,对光反射好。分笼饲养在中山大学北校区实验动物中心清洁级动物房内,全价颗粒饲料喂饲,不限食水,自然昼夜光线照明。室内通风良好,氨体积分数小于20×106,室温保持18~22 C,相对湿度为40%~70%。部分wistar大鼠用链脲佐菌素(STZ)进行诱导,造模前大鼠禁食12 h,自由饮水。将STZ溶于Ph=4.5的0.1 mmoI/L枸椽酸一枸椽酸钠缓冲液,配成2%STZ溶液,2 μm过滤器过滤灭菌后,按60mg/kg单次剂量大鼠左下腹腔注射。7 d后取鼠尾血测血糖,并用尿糖试纸测尿糖。随机血糖浓度≥16.65mmol/L,尿糖在++~+++者即为DM大鼠成功模型。另外部分wistar大鼠空腹12 h左下腹腔注射等量枸椽酸一枸椽酸钠缓冲液。随机抽取22只STZ诱导DM大鼠,分为DM对照组(DM组)和复方血栓通胶囊治疗组(FXST组),每组各11只鼠;从注射等量构椽酸一枸椽酸钠缓冲液大鼠中随机取出9只设为正常对照组(N组)。DM组除了STZ诱导DM外未接受其他治疗;FXST组除了STZ诱导DM外,另外应用复方血栓通胶囊颗粒900 mg/kg治疗,每日1次。实验用复方血栓通胶囊颗粒由广东众生药业股份有限亚虎娱乐电脑提供。所有动物采用经食道灌胃给药方法,N组、DM组大鼠每天每只大鼠灌3 ml灭菌水。每1周测1次体重,每1个月测1次血糖。观察时间为20周。实验期间N组大鼠行动活跃,饮食正常,毛色光滑,无多饮多食多尿现象,体重增长明显;至实验终止时未见白内障形成。DM组和FXST组大鼠均出现行动缓慢、毛色灰暗、多饮多食多尿现象,体重增长缓慢或下降;从第8周开始,已经有个别大鼠出现白内障;至20周时,大鼠均出现较严重的白内障。20周时N组大鼠体重为(496士63)g,DM组大鼠体重为(230±24)g,FXST组大鼠体重为(244土16)g,与正常大鼠相比,DM组大鼠及FXST组大鼠体重增长缓慢,FSXT组与DM组之间大鼠体重比较,没有明显差异(尸>O.05)。造模成功后的各个时间点,DM组及FXST组大鼠血糖明显高于正常对照组;20周N组血糖值为(5。17士O.59)mmol/L,DM组血糖值为(32.89±1。23)mmoI/L,FXST组血糖值为(31.84±3.62)mmoI/L,FXST组与DM组的血糖值比较,没有明显差异(P>O.05)。
第20周时,每组取8只大鼠,经腹腔注射10%水合氯醛0.4 ml/100 g麻醉后,打开胸腔,以连接一个14 G钝性针头的灌注管插入并固定于左心室,剪开右心耳,以生理盐水进行心脏灌注。取其右眼,4%多聚甲醛固定24 h,去掉眼前节,剥离视网膜,将视网膜分成桔瓣样4小片,清水漂洗24 h,3%胰蛋白酶消化液37 C恒温箱中消化3 h,至组织崩解、消化液变混浊。将崩解后视网膜组织移至清水中,解剖显微镜下轻轻吹打漂洗至血管网完全透明,用吸管将视网膜血管网平铺在干净载玻片上,自然晾干;随后行过碘酸-Schiff(PAS)染色,中性树胶封片,光学显微镜下观察拍照。KONTRON IBAS 2.0自动图像分析系统下.200倍目镜下每一标本随机取3个部位,测量血管面积占总面积的百分比。取其算术平均数,代表该样本平均血管相对面积。在生物显微镜下连接Nikon照相机,400倍目镜下对消化铺片样本进行拍照,随机截取5个小范围,至图像分析软件ImagePro Plus下进行周细胞和内皮细胞计数,计算内皮细胞/周细胞(E/P)比值各组随机各取1只大鼠,经腹腔注射10%水合氯醛0.4 ml/100 g麻醉实验动物后,小心摘除右眼眼球,用于透射电子显微镜观察。取好标本后,过量麻醉处死大鼠。摘除眼球,迅速沿锯齿缘剪开,去除眼前节部分;将后段眼杯浸入2.5%戊二醛和2%多聚甲醛的磷酸缓冲液中,固定1 h;取出眼杯,矢状切为两半,取视网膜约1.5 mm×1.5 mm;继续于2.5%戊二醛和2%多聚甲醛的磷酸缓冲液中固定,4 C冰箱过夜;1%锇酸后固定;系列酒精脱水;环氧树脂包埋;500A。超薄切片;常规铅铀双重染色,透射电子显微镜下观察毛细血管超微结构变化并摄片。实验所得血管相对面积、E/P比值均于SPSS统计软件下行One—Way ANOVA分析比较多组样本均数之间的差别。
2结果
光学显微镜下观察,N组视网膜微血管网密度疏松,毛细血管管径粗细均匀一致,走行规则。内皮细胞核长呈椭圆形、染色较淡。周细胞核呈圆形、染色较内皮细胞深(图1)。DM组视网膜微血管网明显变密,毛细血管纡曲,走行紊乱;管径大小不一,出现节段性膨大,某些部位则管腔狭窄甚至闭塞。周细胞数目明显减少。可见较多无细胞毛细血管、周细胞鬼影等(图2)。FXST组视网膜微血管网密度较DM组明显降低,血管走行基本规则,管径相对一致,可见部分节段性膨大。周细胞数日基本正常。无细胞毛细血管、周细胞鬼影等较DM组减少(图3)。血管相对面积统计显示,DM组血管相对面积平均值为(43.39±2.17)%,N组血管相对面积平均值为(34.38±4.14)%。DM组血管相对面积平均值比N组大,二者比较,差异有统计学意义(t=4.936,P<O.05)。FXST组血管相对面积平均值为(38.98±1.96)%,较DM组血管相对面积平均值小,二者比较.其差异有统计学意义(t=3.336,P<o.o5),更接近N组血管相对面积平均值(表1)。E/P分析显示,DM组的E/P明显比N组增高,其差异有统计学意义(表1)。FXST组E/P与DM组E/P相比明显降低,其差异有统计学意义(表2),较接近正常对照组。
电子显微镜观察显示,N组毛细血管由内皮细胞、周细胞和基底膜构成。内皮细胞位于管腔内面,内皮细胞核形态良好,异染色质分布均匀,细胞器形态正常。周细胞形态正常,无肿胀,细胞器无异常。基底膜为连续的膜性结构,电子密度均一,结构清楚,环绕内皮细胞及周细胞(图4A)。DM组毛细血管基底膜增厚显著,电子密度增加。内皮细胞向腔内突出。部分管腔闭塞。周细胞异染色质浓集居边,线粒体肿胀显著。并见空泡性变(图4B)。FXST组改变较DM组轻。毛细血管基底膜轻度增厚,电子密度均匀。内皮细胞无突出,周细胞形态良好(图4C)。
表1不同组间血管相对面积比较(x±s)
组别 N 血管相对面积
N组 5 34.38±4.14
DM组 7 43.39±2.17﹟
FXST组 4 38.98±1.96﹟﹟
注:﹟DM组与N组比较,t=4.936,P<0.05;﹟﹟FXST组与DM组比较,t=3.336,P<0.05
表2不同组间E/P比值比较(x±s)
组别 N E/P比值
N组 4 2.680±0.221
DM组 7 3.610±0.247﹟
FXST组 6 2.935±0.143﹟﹟
 
注:﹟DM组与N组比较,t=6.744,P<O.05;﹟﹟FxsT组与DM组比较,t=6.283。P<O.05
3讨论
STZ诱导DR模型是目前较成熟的早期DR模型。STZ诱导DM成模后,大鼠血糖值持续升高,从而视网膜微血管受损伤,出现周细胞凋亡、血管扭曲、微血管瘤形成等一系列视网膜改变[3,10|。本实验中,20周病程的DM大鼠视网膜消化铺片显示微血管网明显变密,毛细血管纡曲,走行紊乱;管径大小不一,出现
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节段性膨大,某些部位则管腔狭窄甚至闭塞,并可见无细胞毛细血管、周细胞鬼影等。透射电子显微镜观察显示,DM大鼠视网膜毛细血管基底膜明显增厚,部分管腔闭塞,周细胞线粒体出现空泡变。我们的消化铺片结果及透射电子显微镜观察到的微血管改变,与wei等[11]、Gardiner等[12]所做的动物研究结果一致,表明本实验中的DM大鼠存在着微血管病变。符合早期DR的病理改变[2,13]副,早期DR模型建立成功。我们参照李璇等[14]的方法,通过计算视网膜血管相对面积和E/P比值,分别对DM大鼠视网膜毛细血管纡曲膨大程度和周细胞丢失情况进行定量分析。结果表明,DM大鼠视网膜血管相对面积、E/P比值均比正常大鼠升高,这与李璇等[14]的观察结果一致。本研究中,我们还发现,FXST组视网膜毛细血管网密度增高,血管轻度纡衄,管径相对均匀,血管相对面积有所增大,但其改变较DM组轻;E/P比值升高幅度较DM组明显减小;毛细血管基底膜轻度增厚,电子密度均匀,内皮细胞无突出,周细胞形态良好。提示复方血栓通能有效改善微循环,抑制DM大鼠微血管改变。DR的发病机制中,血液黏稠缓慢、氧自由基损伤等发挥了重要的作用[15,16]。复方血栓通有促进血液循环,延长凝血时间,抗微血栓形成,加快微血栓的溶解速度的作用[6,7];并能提高超氧化物歧化酶活性,促进清除自由基[4,5]。这可能是本实验中FXST组大鼠视网膜微血管改变程度较轻微的原因。但由于本实验动物例数较少,同时与人DR病程相比,观察时间较短,因此,以上实验结果只能在一定程度上反映出该药对DM大鼠视网膜病变的干预作用。其确切的治疗效果和作用机制,有待进一步的实验及临床研究,以提供更充分的证据,为DR的临床用药提供支持。
4参考文献
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